本试剂盒仅供科研使用
γ-氨基丁酸（GABA）含量试剂盒说明书
（货号：WS6011W微板法96样）一、产品简介：4-氨基丁酸（GABA）广泛分布在动植物体中。在动物体内GABA几乎只存在于神经组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有G A B A，且与植物的环境应激反应有关。4-氨基丁酸（GABA）在碱性溶液中与次氯酸盐和苯*反应生成蓝绿色物质，通过检测该有色物质在645nm波长处的值，即可得出样本中GABA的含量。二、试剂盒的组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体100mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二液体10mL×1瓶4℃保存试剂三液体20mL×1瓶4℃保存标准品粉体mg×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂。三、所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。四、γ-氨基丁酸（GABA）含量测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：① 组织样本：称取约0.1g组织样本加入研钵中，加入1mL提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm，4℃或室温离心10min，取上清液待测。【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为1：5~10的比例进行提取。② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。2、上机检测：① 酶标仪预热30 min，调节波长到645 nm。② 所有试剂解冻至室温（25℃）。③ 在EP管中依次加入：试剂名称（μL）测定管对照管样本5050试剂一30330试剂二100试剂三200混匀，沸水浴（95-100℃）10min，冰浴至室温，呈现蓝绿色颜色，若浑浊需12000rpm离心5min，取澄清的200μL本试剂盒仅供科研使用2至96孔板中，于645nm处读取各管的A值。△A=A测定-A对照（每个样本需做一个自身对照）。【注】1.若测定管的 A 值大于 0.6，则需将样本进行稀释（用蒸馏水稀释），稀释倍数 D 需代入计算公式重新计算。2.若 A 测定-A 对照的差值在零附近徘徊，则可增加样本取样量（如增至 0.2g），则取样质量 W 代入计算公式重新计算。五、结果计算：1、标准曲线：y = 0.0102x - 0.0003，x为标准品质量(μg)，y为吸光值ΔA。2、按样本质量计算:GABA含量(μg/g重量)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(W×V1÷V)×D=1960.8×(ΔA+0.0003) ÷W×D3、按细胞数量计算：GABA含量(μg/104cell)=[(ΔA+0.0003)÷0.0102]÷(500×V1÷V)×D=3.922×(ΔA+0.0003)×D4、液体中GABA含量计算：GABA含量(μg/mL)=[(ΔA+0.0003) ÷0.0102]÷V1×D=1960.8×(ΔA+0.0003)×DV---提取液体积，1mL；V1---样本加入体积，0.05mL；D---稀释倍数，未稀释即为1；W---样本取样质量；500---细胞数量，万。附：标准曲线制作过程：1标准品母液（2mg/mL）：标准品临用前加1mL蒸馏水溶解。2把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。3按照测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。