本试剂盒仅供科研使用
β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL）试剂盒说明书（货号：WS4250F分光法24样）
一、产品简介：β-半乳糖苷酶（β-GAL，EC 3.2.1.23)又称β-D-半乳糖苷半乳糖基转移酶，简称乳糖酶，专一性作用于β-D-半乳糖苷类化合物的酶，广泛用于生化分析、医学和食品等领域。本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基*酚，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。二、测试盒组成和配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体30mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂mg×1支4℃保存临用前加2ml水。试剂二液体8mL×1瓶4℃保存试剂三液20mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰。
四、β-半乳糖苷酶（β-GAL）活性测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：① 组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，冰浴匀浆，然后12000rpm，4℃，离心10min，取上清作为粗体液，置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞，加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000 rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积（mL)为500~1000:1比例进行提取。③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。2、上机检测：①可见分光光度计预热30min以上，温度设定37℃，波长设定为405nm，蒸馏水调零。②在EP管中依次加入：试剂名称（μL）测定管对照管样本2020试剂一75蒸馏水75试剂二115115迅速混匀，37℃保温30min试剂三540540混匀，全部液体转移到1mL玻璃比色皿（光径1cm）本试剂盒仅供科研使用2中，405nm处测定吸光值A，ΔA=A测定-A对照（每个测定管需设一个对照管）。【注】：若ΔA过小，可增加样本上样量V1（如增至60μL，则试剂三相应减少），或延长保温时间（如：40min或更长），则改变后的V1或T需重新代入计算公式计算。
五、结果计算：1、标准曲线方程：y = 0.022x + 0.0045：x是标准品PNP的质量（nmol），y是ΔA。2、按样本蛋白浓度计算：单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol对-硝基*酚定义为一个酶活性单位。β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(V1×Cpr)÷T=75.76×(ΔA-0.0045)÷Cpr3、按样本鲜重计算：单位定义：每克组织每分钟产生1nmol对-硝基*酚定义为一个酶活性单位。β-GAL活性(nmol/min/g鲜重)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(W×V1÷V)÷T=75.76×(ΔA-0.0045) ÷W4、按细菌或细胞密度计算：单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1nmol对-硝基*酚定义为一个酶活性单位。β-GAL活性(nmol/min/104cell)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷(500×V1÷V)÷T=0.152×(ΔA-0.0045)5、按液体体积：单位定义：每毫升液体每分钟产生1nmol对-硝基*酚定义为一个酶活性单位。β-GAL活性(nmol/min/mL)=[(ΔA-0.0045)÷0.022]÷V1÷T=75.76×(ΔA-0.0045)V---加入提取液体积，1mL；V1---加入反应体系中样本体积，0.02mL；W---样本质量，g；T---反应时间，30min；PNP对分子质量---139.11；500---细胞或细菌数量，万；Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的BCA蛋白含量检测试剂盒。附：标准曲线制作过程：1制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品EP管里面加入1ml蒸馏水。2把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。3在EP管加入：20μL标准品+75μL蒸馏水+115μL试剂二+540μL试剂三，混匀，全部液体转移到1mL玻璃比色皿中，于405nm下读取吸光值。4根据结果制作标准曲线。